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              犬自身免疫性溶血性貧血的診斷
              更新時間:2020/8/14 獸醫網校 在線題庫 微信關注

              犬自身免疫性溶血性貧血的診斷

                  自身免疫性溶血性貧血(autoimmunehemolytic anemia or AIHA)是由于犬體內產生自身抗體,與自身紅細胞發生免疫反應,使紅細胞大量破壞,引起的一種貧血性疾病[1]。AIHA的病因和發病機制迄今仍未完全闡明。目前對未能找到誘發因素的稱為特發性或原發性AIHA,對有明確病因者稱為繼發性AIHA[2]。AIHA發病呈上升趨勢,近兩年筆者遇到5個AIHA病例。資料介紹確診該病要做庫姆斯試驗,但兔抗犬球蛋白血清不容易獲得,此試驗開展很有難度。筆者用自身血清與自身紅細胞反應診斷該病,簡單易行,未見他人報道。現以最近接診一病例為例,報告如下。

              1  病史及臨床癥狀
                  松獅犬,♂,7歲,24 kg,2月5號來我院就診。主訴:2月2號發病,精神沉郁,全身無力,2月3號小便呈濃茶色,4號呈醬油色,絕食兩天,近一個月來飲食、環境等均未改變,家里還有一7歲雜交母犬一切正常。臨床檢查:T:38.6℃、P:150次/min、R:65次/min,可視黏膜、皮膚蒼白發黃,張口呼吸快速淺表,四肢無力。

              2  實驗室檢查

              2.1  血液眼觀檢查 
                  取抗凝血3滴,平鋪在潔凈載玻片上,于明亮處可見很多紅色顆粒。

              2.2  血常規檢查

              2.3  血清生化檢查 
                  ALT:55U/L,AST:35U/L,ALP:62U/L,ALB:25.3,TP:76.4,DBI:12.4μmol/L,TBI:31.1μmol/L,γ-GT:3.6 U/L,AMYL:526 U/L,BUN:7.5mmol/L,CREA:83μmol/L,Ca:2.3 mmol/L,P:1.97mmol/L,CK:65
              U/L,LDH:132 U/L,GLU:6.1 mmol/L,CHOL:6.3mmol/L,TG:0.65 mmol/L。

              2.4  紅細胞形態學檢查 
                  鮮血懸滴鏡檢可見大量紅細胞聚集成團。瑞氏染色鏡檢可見紅細胞大小不均,大量球形紅細胞,大量破裂紅細胞,大量紅細胞集聚成團,少量有核紅細胞。煌焦油藍染色鏡檢可見大量網織紅細胞,約占成熟紅細胞的45%。

              2.5  自身紅細胞與自身血清反應試驗

              2.5.1  抽血  抽患犬靜脈血液5 ml。

              2.5.2  分離血清  將2 ml血液注入一次性試管中靜置并分離出血清。

              2.5.3  分離少白細胞紅細胞  將3 ml血液注入加有抗凝劑的一次性試管中,混勻,離心(條件設置:3500轉/min,10min,溫度4℃[3]),將紅細胞與血漿交界處的白膜層與血漿一起去除,得到少白細胞紅細胞。

              2.5.4  過濾并洗滌紅細胞  將少白細胞紅細胞放入另一一次性試管中,加生理鹽水5 ml,混勻,用一次性袋式輸液器的網式藥液過濾器過濾,離心,去上清液,再加生理鹽水5ml 稀釋混勻,再過濾,如此往復5次。最后一次去上清液后加1ml 生理鹽水混勻,獲得單個洗滌紅細胞液。獲得的洗滌紅細胞液手工計數為2.55×1012/L。

              2.5.5  做對照組 
                  取我院健康獻血犬血液5ml,按上述方法分別獲得血清和洗滌紅細胞液。將洗滌紅細胞液用生理鹽水再稀釋,稀釋后的洗滌紅細胞液紅細胞手工計數為2.80×1012/L。

              2.5.6  自身紅細胞與自身血清反應試驗  取潔凈載玻片4片,分別標注患1、患2、健1、健2。患1、健1分別滴患犬、健康犬的血清、洗滌紅細胞液各100 ul并混勻;患2、健2分別滴患犬、健康犬的血清50ul、洗滌紅細胞液100 ul并混勻。并將4個載玻片放于38.5度無菌培養箱中靜置并計時。每5分鐘鏡檢一次。

              2.5.7  試驗結果


                  (注:按下列標準記錄反應強度:-:紅細胞均勻分布無凝集;+:25%紅細胞凝集;++:50%紅細胞凝集;+++:75%紅細胞發生凝集。)
                  患犬無可查發病誘因;血常規顯示嚴重貧血;鏡檢網織紅細胞、有核紅細胞比例增高,紅細胞再生良好;鏡檢有破裂紅細胞、紅細胞聚集成團,生化總膽紅素、間接膽紅素升高,臨床癥狀茶色、醬油色尿,紅細胞出現溶血;自身血清、紅細胞出現凝集現象;其它臟器生化指標正常,其他臨床癥狀正常。綜合以上確診為犬原發性自身免疫性溶血性貧血。該犬經治療無效,于15日晚死亡。

              3 討論

              3.1  該病診斷要明確以下問題:有無貧血,什么性質的貧血,是否存在自身抗體與自身紅細胞發生免疫反應。

              3.2  筆者遇到的幾個病例,血液中均有集結成團的紅細胞,試驗時,一定要過濾血液并獲得單個紅細胞溶液。一次性袋式輸液器的網式藥液過濾器,孔徑為15um±2um(紅細胞直徑為6.6-7.7um[4]),用它過濾較為理想。

              3.3  用過濾、洗滌后的紅細胞與自身血清反應診斷自身免疫性溶血性貧血,筆者還沒看到相關報道。該試驗簡單易行,隨時可以做,治療過程中,還可及時了解血清與紅細胞凝集加重還是減輕,更能準確的對疾病的預后做出判斷。

              3.4  對有自身抗體與自身紅細胞明顯凝集時,用上試驗簡單方便,對有自身抗體但不產生凝集或凝集不強時,上試驗敏感性低甚至檢驗結果陰性,需要做庫姆斯試驗。

              3.5  庫姆斯試驗要用兔抗犬球蛋白血清,但兔抗犬球蛋白血清不容易獲得,該試驗很受限制。即使可以做該試驗,對有紅細胞出現凝集的血液也要過濾,如果不過濾,就無法判斷凝集顆粒是血液中的還是試驗中形成的。筆者所查到的有關庫姆斯試驗的資料都沒有介紹要過濾及過濾的具體方法。

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